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甘油三酯（ TG） 含量檢測試劑盒說明書

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

規(guī)格：100T/96S 產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：自備，取玻璃空瓶，加入 60mL 正庚烷，60mL 異丙醇，蓋緊后混勻，4℃保存。

試劑二：液體 3mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑六：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

標準品：粉劑×1 瓶，臨用前加 5mL 試劑一，即 1mg/mL 甘油三酯標準溶液，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

TG 是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 測定原理： 用異丙醇抽提取 TG，KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸，過碘酸氧化甘油生成甲醛， 在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色物質(zhì)，在 420 nm 有特征吸收峰，其顏色的深淺與 TG 含量成正比。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、微量比色皿/96 孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、雙蒸水、125mL 玻璃空瓶。

操作步驟:

一、TG 的提取：

1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL 試劑一）進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清待測。

2、 細胞、細菌：先收集 400-500 萬細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，加 1mL 試劑一，超聲波破碎

1min（強度 20％，超聲 2s，停 1s），8000g， 4℃離心 10min，取上清待測。

3、 血清（漿）等液體樣品：直接測定。二、測定操作：

1.分光光度計/酶標儀預熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 420 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.水浴鍋預熱到 65℃。

空白管標準管測定管

雙蒸水（µL）40

標準液（µL）40

TG 待測液（µL）40

試劑一（µL）125125125

試劑二（µL）252525

加試劑一后充分混勻，再加試劑二，劇烈振蕩 30s，靜置，待分層后取上層溶液 15µL，置于新的 EP 管中。

3.甘油三酯含量測定：

空白管標準管測定管

上層溶液（µL）151515

試劑三 （µL）505050

試劑四（µL）151515

充分混勻，65℃水浴 3min

試劑五（µL）505050

試劑六（µL）505050

充分混勻，65℃水浴 15min

轉(zhuǎn)移至微量比色皿/96 孔板測定 420nm 處吸光度，記為 A 空，A 標和 A 測。注意：空白管和標準管只需測定一次。

三、計算公式：

1.血清（漿）中甘油三酯含量：

TG 含量（mg/dL）=C  標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）

=（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）

C 標準品：1mg/mL；100：單位換算系數(shù)，1dL=100 mL。

2.組織中甘油三酯含量：

(1)按樣本蛋白濃度計算

TG 含量（mg/ mg prot）= C  標準品×V×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷（Cpr×V）

=（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷ Cpr

(2)按樣本鮮重計算

TG 含量（mg/ g 鮮重）=C  標準品×V×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷W

=（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷ W

C 標準品：1mg/mL ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；V：加入試劑一的體積，

1mL。

3.細胞、細菌中甘油三酯含量：

TG 含量（mg/104 cell）=C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷細菌或細胞密度

=（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷細菌或細胞密度

C 標準品：1mg/mL；細菌或細胞密度：104 cell /mL。

注意事項：

1.試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實驗過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應該及時蓋緊。

2.加試劑二后需劇烈震蕩，使待測液中甘油三酯得到充分提取。

3.最低檢出限為 100µ mol/L。

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